規(guī)格:100mL | 500mL
保存:常溫保存,有效期 24 個月。
產品簡介:
一些組織內含有骨質或鈣化灶時,含鈣的組織不宜直接用石蠟包埋切片。這是因為鈣和石蠟之間的密度不同,較難切除完整的切片。對含鈣組織最好固定之后,再進行脫鈣或二者同時進行。然后進行下游的實驗,如脫水、透明、浸蠟、包埋、切片。用于脫鈣的試劑很多,脫鈣劑包括有機酸、無機酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及電解法脫鈣。
EDTA 是一種相對較好的螯合脫鈣劑,對組織結構影響最小,可以較好的保存組織的某些酶類, 經 EDTA脫鈣后的組織可以進行免疫組化和原位雜交染色。但是該法脫鈣速度太慢,一般脫需要數(shù)周至數(shù)月。
EDTA 脫鈣液優(yōu)點:①經 EDTA 脫鈣的組織染色結果好;②對組織的結構損害??;③用化學方法測試可以確定脫鈣的終點。
EDTA 脫鈣液缺點:①脫鈣速度很慢,不適合常規(guī)標本脫鈣使用;②脫鈣后組織會稍微變硬。
操作步驟:
1,骨組織脫鈣時,取材不易過厚,一般大約 5mm。
2,組織固定后,用 PBS 清洗 3 次,每次 20min。
3,組織用蒸餾水洗清洗 3 次,每次 20min。
4,組織轉移至 20~30 倍體積的 EDTA 脫鈣液中,脫鈣 10~30 天或更長時間。如果想加快脫鈣速度,可以置于 37℃進行脫鈣。如果必要,更換新的 EDTA 脫鈣液繼續(xù)脫鈣,多數(shù)組織脫鈣 2 周~3 個月即可,每周更換一次,直至終點。亦可采用微波快速脫鈣法:微波爐設在 200W 左右的檔位,每次加熱 5min,依據組織厚度和密度重復 3~5min,中間間隔 3~5min。
5,用蒸餾水沖洗數(shù)次。
6,常規(guī)脫水、包埋。
注意事項:
1,厚度 5mm 的骨組織塊脫鈣時間一般脫鈣 10~30 天即可。
2,適當加溫能加快脫鈣的速度,一般不應超過 37~40℃,溫度過高容易使骨組織造成松散解體,尤其不可大于 60℃。
3,脫鈣應徹底,防止脫鈣不足或過度。脫鈣程度應控制在不影響組織切片的同時盡量縮短脫鈣時間,以免脫鈣過長引起組織損害。
4,脫鈣用具避免使用金屬容器,盡量使用玻璃容器。
5,骨組織脫鈣應先固定后脫鈣或脫鈣固定同時進行,不應先脫鈣后固定,以便減少組織的損傷程度。
6,每隔一段時間檢測一次脫鈣程度,避免脫鈣過度,脫鈣過度會增加組織的損傷程度,影響染色結果。
7,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
附錄:
脫鈣終點的測定(物理法):采用針刺、手掐、鉗夾等方法,當骨組織變軟或針刺時沒有阻力感即可終止脫鈣。物理檢測法會對組織結構有一定的損害, 盡量避免用力過大或反復檢測。